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在轮胎上看见有大神使用冷冻方式保存回收酵母，出于好奇在网上搜索了相关资料，但资料上甘油使用量和论坛大神的有区别，不知道怎么选择，所以转载过来，让轮胎上的各位大神，指导教授下。冻存酵母是长期保存液态酵母的有效手段, 专业酵母库（yeast bank）使用深冷机，冷冻温度可达-80摄氏度，几乎可以无时限的存储酵母。家用冰箱冷冻温度一般在-20摄氏度，操作得当酵母冻存一年后的活性能保持在冻存前的70-80%。
冻存酵母操作简单，家酿容易实现。
需要的设备为离心管或样品瓶等带盖可密封容器，天平、量杯等称量设备，电冰箱或冰柜；如果冰箱具备自动除霜功能，须额外准备泡沫箱之类的保温箱和冰袋。
操作时对两个技术点多加注意即可。
细胞冷冻保护剂的配方；
操作过程。
细胞冷冻保护剂的配制（1L）
食品级甘油 （CAS：56-81-5）：200g
纯水：800g （有条件的可用YEPD替代）
抗坏血酸（Ascorbic Acid，CAS：50-81-7，建议使用，可选，起抗氧化作用）：1g
混合均匀，加热灭菌，冷却备用。
操作过程
a. 按常规方法扩培酵母，将培养时间延至48小时，让酵母有足够的时间积累糖原（Glycogen）；
b. 将酵母移至4摄氏度环境储存48小时，让酵母积累海藻糖（Trehalose），同时沉淀分层；
c. 倒掉上层培养液，称量剩余酵母泥的重量，加入和酵母泥等量的冷冻保护剂，轻摇混合均匀。此时甘油的浓度为10%。
d. 将混合均匀的酵母液分装，倒入消毒过的离心管或样品瓶中。加盖密封，冷藏24小时；
e. 取出轻轻摇匀，放入冰箱冷冻室，-20摄氏度保存即可。如果冰箱有自动除霜功能，需要将分装后的酵母放置于装有冰袋的保温箱内，连同保温箱一起放入冰箱。
注意事项
甘油的最终浓度在7.5%-15%区间内为最优，过低无法起到保护作用，过高会伤害酵母。
冷冻或解冻酵母都建议在冰箱冷藏室过渡24小时。避免酵母承受过大的温度变化率。
请注意每个操作步骤的灭菌、避菌工作。
化冻后的酵母使用方法和常规液体酵母相同。 |
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发表于 2022-1-13 11:40:45
